Síntesis de péptidos con y sin restricción conformacional de las proteínas HPV16 L1 y HPV16 E7, para su posterior estudio de reactividad

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Resumen

At present, we have generated about 500,000 annual deaths worldwide due to cervical cancer, problems of health that also reached the social sphere, together with its predecessor, the human papilloma virus, so it is necessary to start to generate new methods of treatment and diagnosis of these. The various studies on peptides have led to believe that the design of key sequences of native proteins, can be the solution to generate structural pampering that generate a large immune response against viruses that generate serious illnesses. According to the above this research was conducted, starting with finding the L1 and E7 of human papillomavirus genotype 16 virus proteins in the database Protein Data Bank (PDB), these data were worked on I-TASSER, where one of these blast was performed and an approximation of the tertiary structure generated, this was analyzed and fragments were determined with conformational restrictions are exposed and exhibit high antigenicity. HPV16 E7 protein helices 1 and 3 present were chosen between residues 7-16 and 74-84 respectively. HPV16 L1 protein helices 2 and 4 present were chosen between residues 385-394 and 414-425 respectively and FG and HI loops being residues 273-284 and 348-360 respectively. thus obtaining a total of 6 peptides which were synthesized with their respective linear conformational constraint and its counterpart by peptide synthesis strategy Fmoc solid phase. To generate the proper conformational constraints of each of the sequences the nucleation site JAZ was used (patent pending by the University District and Poteoma group), which managed to stabilize alpha-helix conformations and loop of different sequences short. Of each of the peptides synthesized analysis was performed by HPLC, mass circular dichroism, whereby obtaining the desired peptides as evidenced the formation and stabilization of the corresponding conformational constraints, most purity levels and percentages high yields.

Descripción

En la actualidad, se han generado alrededor de 500.000 muertes anuales a nivel mundial debido al cáncer de cuello uterino, problemática de salubridad que llegó además al ámbito social, junto con su precursor, el virus del papiloma humano, por lo cual se hace necesario empezar a generar nuevos métodos de tratamiento y diagnóstico de estos. Los diversos estudios en péptidos han llevado a creer que el diseño de secuencias claves de proteínas nativas, pueden ser la solución para generar mimos estructurales que generen una gran respuesta inmune frente a virus que generan enfermedades graves. De acuerdo a lo anterior se realizó esta investigación, empezando con la búsqueda de las proteínas L1 y E7 del virus del papiloma humano genotipo 16 en la base de datos Protein Data Bank (PDB), estos datos se trabajaron en I-TASSER, en donde se realizó un blast de estas y se generó una aproximación de la estructura terciaria, esta se analizó y se determinaron los fragmentos con restricción conformacional que se encuentran expuestos y presentan una alta antigenicidad. De la proteína HPV16 E7 se eligieron las hélices 1 y 3 presentes entre los residuos 7 a 16 y 74 a 84 respectivamente. De la proteína HPV16 L1 se eligieron las hélices 2 y 4 presentes entre los residuos 385 a 394 y 414 a 425 respectivamente y las loops FG y HI siendo los residuos 273 a 284 y 348 a 360 respectivamente. Obteniendo así un total de 6 péptidos, los cuales se sintetizaron con su respectiva restricción conformacional y su homólogo lineal mediante la estrategia de síntesis de péptidos en fase sólida Fmoc. Para generar las debidas restricciones conformacionales de cada una de las secuencias se utilizó el sitio de nucleación JAZ (en proceso de patente por parte de la Universidad Distrital y grupo Poteoma), el cual logró estabilizar las conformaciones alfa-hélice y loop de las diferentes secuencias cortas. De cada uno de los péptidos sintetizados se realizó análisis por HPLC, masas y dicroísmo circular, mediante los cuales se evidencia la obtención de los péptidos deseados al igual que la formación y estabilización de las restricciones conformacionales correspondientes, la mayoría con niveles de pureza y porcentajes de rendimientos altos.

Palabras clave

Síntesis de péptidos, Virus del papiloma humano, Cáncer de cuello uterino

Materias

Licenciatura en química - Tesis y disertaciones académicas , Péptidos , Proteína HPV16L1 , Proteína HPV16E7 , Papilomavirus - Estudio de casos , Cuello uterino - Cáncer - Estudio de casos

Citación