Implementación y desarrollo de las técnicas spot síntesis y spot Elisa

Abstract

El método más extendido para la determinación de anticuerpos y detección de seres infectados con alguna enfermedad infecciosa es la técnica de ELISA. Pero un paso inicial que se debe llevar a cabo es la identificación de los determinantes antigénicos o sitios reconocidos por los anticuerpos generados por una proteína. Para identificar estos sitios se hace uso de un tamizaje de péptidos que comprende toda la secuencia de la proteína. Esta librería o biblioteca de péptidos se realiza por síntesis múltiple en bolsas, pines o en papel. Esta última técnica utiliza los grupos hidroxilo de los carbohidratos de la celulosa para hacerlos reaccionar con beta alanina. La beta alanina hace las veces de espaciador y de funcionalizar con grupos amino en la celulosa, permitiendo continuar la adición de otros aminoácidos. Para no tener que retirar las secuencias sintetizadas, el ensayo de ELISA se lleva a cabo in situ en lo que se denomina spot ELISA. Tanto la síntesis como el ensayo de ELISA llevan el apelativo de spot, debido a que el papel se marca con lápiz para la síntesis y se forman pequeños círculos en los puntos marcados sobre el papel, en donde cada una de estas manchas es el espacio en donde se construye una secuencia peptídica diferente, y en donde observamos las reacciones antígenoanticuerpo entre las secuencias peptídicas localizadas en las manchas y los anticuerpos que se adicionan en forma de gotas en cada una de las manchas que se muestran sobre la superficie del papel.