Diseño de un Marcador Molecular para Identificar el Segmento VS4 el Gen omp1 de Chlamydia Trachomatis en Mujeres Embarazadas con Presión Arterial Alta Asociada a Preeclampsia

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Resumen

Chlamydia trachomatis is a gram negative bacteria intracellular by force which causes severe conditions (STD) for the health of women, men and children, which in the majority of cases don't present symptoms making its detection difficult. In addition it causes different pathologies depending on the host and the site of infection. To counter this problematic it was proposed to design an efficient, specific, sensible and economic molecular marker to identify the VS4 segment of the gene omp1 of the MOMP protein of Chlamydia trachomatis in pregnant women with preeclampsia, living in a specific sector of Bogotá, Colombia, and identify the serovar present in this segment, which cause genital illnesses or infections. To succeed, bioinformatic programs and tools such as GenBank, PickPrimer and Blast of NCBI on one hand, and NetPrimer and Primer3 on the other hand, have been used to find the theoretical support for the idea and for design of these molecular markers, while for the amplification of the segment conventional chain reactions of polimerasa, in warm medium and in real time were used in order to, finally, read out the DNA segments using electrophoresis in an agarose gel. Three pairs of molecular markers were obtained, called SV2, SV4 and SV3 which amplified the segments of 128pb (region VS3), 277pb (region VS4) and 282pb (region VS3-VS4) respectively, in male and female using the HotStartPCR technique. Additionally, the marker pair SV3 showed a high sensibility and specifity as it already could identify the presence of C. trachomatis in DNA samples of only 3ng/µl doing the test with qPCR. As far as the serovar were concerned, ten (10) derivatives of the variants B, D, E, F, G and L, originators of genital-urinary and eye disorders were recognized. It can be concluded that the molecular markers designed in this investigation though they need to be applied with the HotStartPCR or qPCR, fulfill the awaited requirements and permit the detection of this STD in men as in women. However it is recommended to realize a study focused on pregnant women with preeclampsia for the simple reason that this part of the study could not be accomplished with.

Descripción

Chlamydia trachomatis es una bacteria gram negativa intracelular obligada que causa grandes afecciones a la salud (ITS) de mujeres, hombres y niños y que en la mayoría de los casos no presenta síntomas dificultando su detección. Adicionalmente, causa diferentes patologías dependiendo del hospedero y el lugar de infección. Ante esta problemática se planteó diseñar un marcador molecular eficaz, especifico, sensible y económico para identificar el segmento VS4 del gen omp1 de la proteína MOMP de Chlamydia trachomatis en mujeres embarazadas con preeclampsia de un sector de Bogotá e identificar las serovariantes presentes en este segmento que causan enfermedades o infecciones genitales. Para lograrlo se recurrió a programas y herramientas bioinformáticas como, por un lado GenBank, PickPrimer y Blast de NCBI, por otro lado NetPrimer y Primer3 para el diseño y comprobación teórica de estos marcadores moleculares; mientras que para la amplificación del segmento se realizaron Reacciones en Cadena de Polimerasa (PCR) convencional, en caliente y en tiempo real para, finalmente, dar lectura en electroforesis con gel de agarosa. Posteriormente, se obtuvo como resultado tres pares de marcadores moleculares llamados SV2, SV4 y SV3 que amplificaron segmentos de 128 pb (región VS3), 277 pb (región VS4) y 282 pb (región VS3-VS4) respectivamente, en mujeres y hombres por medio de la técnica HotStartPCR; adicionalmente, el par de marcadores moleculares SV3 mostró una alta sensibilidad y especificidad ya que pudo identificar la presencia de C. trachomitis en muestras de ADN de tan solo 3ng/µl al realizarse la prueba con qPCR y en cuanto a las seroviariantes, se reconocieron diez derivadas de las variantes B, D, E, F, G y L, causantes de enfermedades genitourinarias y oculares. Se puede concluir que los marcadores moleculares diseñados en este trabajo cumplen con los requisitos deseados pero necesitan ser aplicados con la técnica de HotStartPCR o qPCR y permite detectar esta ITS tanto en hombre como mujeres, sin embargo se recomienda realizar un estudio enfocado a mujeres embarazadas con preeclampsia porque esta parte del estudio no pudo ser completada.

Palabras clave

Chlamydia trachomatis, Gen omp1, ITS, Marcador molecular, Bioinformática, HotStartPCR, Serovariante, Segmento VS4, Proteína MOMP

Citación