Leyva Rojas, Jorge AlonsoValderrama Rincón, Juan DanielInfante Matenzo, Ricardo AndrésMora León, Oswan Duvan2019-03-142019-03-142017-02-28http://hdl.handle.net/11349/14444El estudio, desarrollo y aplicación de técnicas moleculares, en especial de la tecnología de ADN recombinante, se ha convertido en una alternativa para la producción de antígenos, adquiriendo gran relevancia debido a las utilidades biológicas, químicas y médicas. El objetivo principal de este proyecto fue la amplificación, clonación y expresión de genes (kmp11, hsp70, tsa, lack y hlyA) de Leishmania infantum en cepas recombinantes de bacterias (MC4100, JC8100 y BL-21) de E. coli. Para tal fin se realizaron protocolos de extracción (Extracción de plásmido con columna Econospin), transformación (Transformación por choque térmico [congelación -descongelación] – sonicación, solución TSS y Electroporación) y amplificación (PCR tipo Touchdown). Los productos de estos procedimientos se analizaron a través de electroforesis de gel de agarosa, Dot Blot y Western Blot, los cuales por medio de bandas logra suponer la presencia de los antígenos de interés. Se espera que este procedimiento sea útil para el aporte al análisis de actividad inmunológica en organismos vivos y posterior fabricación de vacunas o tratamientos de la enfermedad de leishmaniasis.The study, development and application of molecular techniques, especially recombinant DNA technology, has become an alternative for the production of antigens, acquiring great relevance due to the biological, chemical and medical utilities. The main objective of this project was the amplification, cloning and gene expression (kmp11, hsp70, tsa, lack and hlyA) of Leishmania infantum in recombinant strains of E.coli (MC4100, JC8100 and BL-21) bacteria. For this purpose, extraction protocols (plasmid extraction with Econospin column), transformation (thermal shock transformation [freezing - defrosting] - sonication, TSS solution and Electroporation) and amplification (Touchdown type PCR) were performed. The products of these procedures were analyzed by agarose gel electrophoresis, Dot Blot and Western Blot, which by means of bands manages to suppose the presence of the antigens of interest. It is expected that this procedure will be useful for the contribution to the analysis of immunological activity in living organisms and later manufacture of vaccines or treatments of leishmaniasis disease.pdfspaAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacionalhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/GenesPCR TouchdownClonaciónTransformaciónHibridaciónLicenciatura en Química - Tesis y disertaciones académicasClonación de genesADNADN recombinanteProducción de antígenosinfo:eu-repo/semantics/restrictedAccessGenesPCR TouchdownCloningTransformationHybridizationCreación o InterpretaciónRestringido (Solo Referencia)