Contribución a la modificación genética del bacteriofago φsan23 mediante inserción de un tag de histidina o el gen gfp
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2025-12-10
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Universidad Distrital Franciso Jose de Caldas
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Marín Castañeda, Camilo Andrés (2025). Contribución a la modificación genética del bacteriofago φsan23 mediante inserción de un tag de histidina o el gen gfp. Universidad Distrital Franciso Jose de Caldas. https://hdl.handle.net/11349/100636
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Resumen
The prevalence of Salmonella enterica necessitates the development of novel biotechnological tools for its detection and control, with bacteriophage engineering emerging as a promising strategy. In this context, experimental conditions for the genetic modification of the phage φSan23 were standardized using the BRED technique, identifying viral DNA integrity as the critical control point. Analysis of initial assays revealed that genetic material degradation was due to excessive drying during extraction; strict optimization of this parameter (reduction to 15 minutes) yielded high-purity, high-molecular-weight DNA (32.1 ng/μL), essential for recombination. Simultaneously, a cold distilled-water washing protocol was validated for electrocompetent Salmonella S25pp cells, effectively eliminating effluents and preventing electrical arcing. This enabled the successful recovery of viable phages after electroporation, providing a solid foundation for future genetic editing of this virus
Descripción
La prevalencia de Salmonella entérica requiere el desarrollo de nuevas herramientas biotecnológicas para su detección y control, donde la ingeniería de bacteriófagos se perfila como una estrategia prometedora. En este contexto, se estandarizaron las condiciones experimentales para la modificación genética del fago φSan23 mediante la técnica BRED, identificando la integridad del ADN viral como el punto crítico de control. El análisis de los ensayos iniciales reveló que la degradación del material genético se debía al secado excesivo durante la extracción; la optimización estricta de este parámetro (reducción a 15 minutos) produjo ADN de alta pureza y alto peso molecular (32,1 ng/µL), esencial para la recombinación. Simultáneamente, se validó un protocolo de lavado con agua destilada fría para células electrocompetentes de Salmonella S25pp, eliminando eficazmente las sales y previniendo la formación de arcos eléctricos. Esto permitió la recuperación exitosa de fagos viables tras la electroporación, sentando una base sólida para la futura edición genética de este virus