Normalización de la amplificación mediante qPCR de los genes ID1 e ID3 a partir de biopsias de adenocarcinoma gástrico embebidas en parafina y línea celular AGS
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2020-02-24
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Descripción
En Colombia, para el año 2018 el cáncer gástrico (CG) presentó una elevada tasa de incidencia y mortalidad, siendo el cuarto cáncer más frecuente en ambos sexos. La sobre expresión de ID1 e ID3 en diversos tipos de cáncer, incluyendo el cáncer gástrico da cuenta de su papel en la tumorogénesis en diversos tejidos. Estudios demuestran que la sobreexpresión en CG de estos genes está relacionada con el potencial carcinogénico de las células tumorales gástricas, la pobre diferenciación, etapas avanzadas de la enfermedad y mayor agresividad tumoral de modo que estos genes podrían ser considerados como marcadores moleculares para el tratamiento, el pronostico, y la prevención de la enfermedad. Los departamentos de patología archivan un gran número de muestras embebidas en parafina fijadas con formalina (FFPE), material que representa un recurso disponible y poco empleado en el estudio de biomarcadores, debido a que las propiedades químicas del ARN y el ADN cambian en el proceso de fijación con formalina. El objetivo de este trabajo fue normalizar una metodología para la amplificación de los genes ID1 e ID3 apartir de ARN obtenido de biopsias FFPE de cáncer gástrico y de la línea celular AGS. En este estudio se incluyeron biopsias embebidas en parafina de algunos pacientes con CG tratados en el Instituto Nacional de Cancerología (INC), el ARN fue extraído de secciones de FFPE, posteriormente fue sometido a PreAmp y amplificado mediante qPCR, encontrando que sin el uso del PreAmp, la estabilidad del gen constitutivo GAPDH fue mejor que cuando este se utilizó, pero el ciclo umbral se da más tardíamente sin ese tratamiento para los genes ID1 e ID3. Adicionalmente de manera tentativa se realizarón ensayos de citotoxicidad con Cannabidiol en la línea celular AGS debido a que este compuesto tiene propiedades antitumorales y de regulación negativa para el gen ID1.
Resumen
In Colombia, by 2018, gastric cancer (GC) had a high incidence and mortality rate, being the fourth most common cancer in both sexes. Overexpression of ID1 and ID3 in various types of cancer, including gastric cancer, accounts for their role in tumorogenesis in various tissues. Studies show that CG overexpression of these genes is related to the carcinogenic potential of gastric tumor cells, poor differentiation, advanced stages of disease and increased tumor aggressiveness so that these genes could be considered as molecular markers for treatment, forecasting, and disease prevention. Pathology departments archive a large number of paraffin embedded specimens fixed with formalin (FFPE), material that represents an available resource and little used in the study of biomarkers, because the chemical properties of RNA and DNA change in the formalin binding process. The objective of this work was to normalize a methodology for the amplification of the ID1 and ID3 genes from RNA obtained from gastric cancer FFPE biopsies and the AGS cell line. This study included paraffin-embedded biopsies of some GC patients treated at the National Institute of Cancerology (INC), RNA was extracted from FFPE sections, then submitted to Preamp and amplified by qPCR, finding that without the use of Preamp, the stability of the constituent gene GAPDH was better than when it was used, but the threshold cycle occurs later without that treatment for the ID1 and ID3 genes. Additionally, cytotoxicity tests with Cannabidiol are tentatively performed on the AGS cell line because this compound has antitumor and negative-regulation properties for the ID1 gene.
Palabras clave
FFPE, qPCR, Línea Celular AGS, Amplificación, Cáncer Gástrico, Biomarcadores