Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11349/6579
Title: Evaluación de la expresión de los genes que codifican para proteínas de choque térmico HSP de plántulas de arroz (Oryza Sativa) irradiadas con 60co tolerante, resistente y susceptible al estrés por altas temperaturas
Author: Arce Lozano, Rodolfo Elías
Martínez Saavedra, Cindy Johanna
Advisor: Becerra Galindo, Luis Francisco
Subjects: Licenciatura en Biología - Tesis y disertaciones académicas
Arroz - Genética
Cultivo hidropónico
Arroz - Plántulas
Keywords: Proteínas de choque térmico
Estrés térmico
Oryza sativa
Cultivos hidropónicos
Date: 28-Jul-2017
Abstract: Plants are organisms that are constantly exposed to different types of abiotic stress altering their optimum development and therefore the productivity of crops is affected. Due to the stress generated by the temperature variation, the plants have developed a group of proteins known as heat shock proteins (HSPs), which act as molecular chaperones, helping the plant in the processes of adequate protein folding, transport through Of membranes, modulation of the protein activity and regulation of protein degradation, thus contributing, tolerance to the plant against the constant change of temperature. The present work evaluated the expression of genes encoding the heat shock proteins sHsp's (Hsp16.9, Hsp18, Hsp26.7), Hsp70 and Hsp90 in rice varieties (Oryza sativa): Fedearroz 473, Fedearroz Mocarí and Advanced line Lv 1645 that have been irradiated with a dose of 60 Gy of 60 Co in its first generation. For this purpose, hydroponic cultures with Yang medium were carried out for each of the varieties; Once they reached the seedling stage were subjected to heat stress for one day from 11:00 am to 3:10 p.m. as follows: a control treatment (TC) at a temperature of 28 ° C, a moderate stress treatment ( T1) at 35 ° C and a high stress treatment (T2) at 42 ° C. During each treatment three RNA extractions and total proteins were performed for each variety at three different times; The first extraction was done at 11:10 am, the second at 1:10 pm and the last at 3:10 pm. The RNA was quantified through the Thermo Scientific NanoDrop 2000c UV-Vis spectrophotometer, subsequently the samples of better characteristics were selected for the development of the work. Through the real-time polymerase chain reaction (q-RT-PCR) an absolute quantification of the genes of interest was made; The total proteins were quantified by the Bradford method, in addition 12.5% sodium dodecylsulfate polyacrylamide gels (SDS-PAGE) were made. The results showed that the three genotypes F473, Mocarí Lv 1645 do not present significant differences in the growth of the seedlings during the four hours of exposure to the heat stress due to high temperatures, on the other hand a dose of 60 Gy of Co generates physical alterations in The Mocarí and Lv 1645 varieties, at the level of heat shock protein expression (Hsp) in the three genotypes, this increases as temperature increases as a protective mechanism of the seedling and the expression of these genes is related to tolerance At high temperatures, being Fedearroz 473 tolerant, Mocari resistant and Advanced line 1645 susceptible to high temperatures. At the protein level it is concluded that the proteins with the highest intensity correspond to 50 kDa, being corresponding to glutelinic proteins that constitute between 70 and 90% of total proteins in rice.73/5000
Description: Las plantas son organismos que se encuentran constantemente expuestos a diferentes tipos de estrés abiótico alterando su desarrollo óptimo y por ende la productividad de los cultivos se ve afectada. Debido al estrés generado por la variación de temperatura, las plantas han desarrollado un grupo de proteínas conocidas como proteínas de choque térmico (HSP), que actúan como chaperonas moleculares, ayudando a la planta en los procesos de plegamiento adecuado de proteínas, transporte a través de membranas, modulación de la actividad proteica y regulación de la degradación de proteínas, aportando de esta manera, tolerancia a la planta frente al cambio constante de temperatura. El presente trabajo evaluó la expresión de los genes que codifican las proteínas de choque térmico sHsp’s (Hsp16.9, Hsp18, Hsp26.7), Hsp70 y Hsp90 en variedades de arroz (Oryza sativa): Fedearroz 473, Fedearroz Mocarí y Línea avanzada Lv 1645 que han sido irradiadas con una dosis de 60 Gy de 60 Co en su primera generación. Para tal fin se realizaron cultivos hidropónicos con medio Yang para cada una de las variedades; una vez alcanzaron el estadio de plántula fueron sometidas a estrés térmico durante un día de 11:00 am a 3:10 pm de la siguiente manera: un tratamiento control (TC) a una temperatura de 28°C, un tratamiento de estrés moderado (T1) a 35°C y un tratamiento de estrés alto (T2) a 42°C. Durante cada tratamiento se realizaron tres extracciones de ARN y proteínas totales para cada variedad en tres momentos diferentes; la primera extracción se hizo a las 11:10 am, la segunda a la 1:10 pm y la última a las 3:10 pm. El ARN se cuantifico a través de Thermo Scientific NanoDrop 2000c UV-Vis spectrophotometer, posteriormente se escogieron las muestras de mejores características para el desarrollo del trabajo. Por medio de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (q-RT-PCR) se hizo una cuantificación absoluta de los genes de interés; se cuantificaron las proteínas totales por el método de Bradford, adicional a ello se realizaron geles de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE) al 12.5%. Como resultados se obtuvo que los tres genotipos F473, Mocarí Lv 1645 no presentan diferencias significativas en el crecimiento de las plántulas durante las cuatro horas de exposición al estrés térmico por altas temperaturas, por otro lado una dosis de 60 Gy de Co genera alteraciones físicas en las variedades Mocarí y Lv 1645, a nivel de expresión de proteínas de choque térmico (Hsp) en los tres genotipos, esta incrementa a medida que aumenta la temperatura como mecanismo de protección de la plántula y la expresión de estos genes está relacionada con la tolerancia a altas temperaturas, siendo Fedearroz 473 tolerante, Mocarí resistente y Línea avanzada 1645 susceptible a altas temperaturas. A nivel proteico se concluye que la proteína que presenta mayor intensidad corresponde a 50 kDa, siendo está correspondiente a proteínas glutelinicas que constituyen entre el 70 y 90% de proteínas totales en arroz.
URI: http://hdl.handle.net/11349/6579
Appears in Collections:Licenciatura en Biología

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
ArceLozanoRodolfoElías2017.pdfTrabajo de Grado7,03 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.