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Title: Análisis de la expresión del gen IGF-I identificado como oncogen en células de glioma de ratón parentales y transfectadas usando estrategia de terapia génica por triple hélice y antisentido
Author: Castillo Higuera, Leidy Tatiana
metadata.dc.contributor.advisor: Trojan, Jerzy Leslaw
Ayala Fajardo, Adis
Bermudez Fernandez, Antonio José
Keywords: IGF-I
Cáncer
Glioma
Terapia Génica
Date: 29-Feb-2016
Abstract: Cancer is a worldwide public health problem due to its mortality rate. It was shown that in Colombia we have 2-19 glioblastoma patients / 100,000 inhabitants per year. Glioblastoma constitutes a primary glial malignant tumor of CNS; the research investigations of glioblastoma have demonstrated a significant increase in IGF-I gene expression in this brain tumor. The objective of this study was to use gene therapy technology of either antisense, AS, or triple helix, TH, type to explore the levels of IGF-I gene expression in somatic transfected cells. The cells of rat C6 glioma line were transfected in vitro with IGF-I AS, IGF-I TH expression vectors, and with control pMT-EP empty vector, using lipofectin reagent. The IGF-I gene expression in cultured cells was investigated by RT-PCR performed with TaqMan probes; a 800pb fragment of the promoter region of this gene was evaluated by capillary electrophoresis. A decrease in IGF-I gene expression, as 80% and 60%, was demonstrated in case of used TH and AS technologies, respectively. The sequences of 800 bp fragment of IGF-I gene studied in human normal samples, front brain tumor samples and glioma samples, had no demonstrated the mutations. These promising findings allow to investigate the human cells in vitro in a new way. The presented in vitro results can be applied for preparation of cell vaccines to be used in vivo in cell gene therapy.
Description: El cáncer constituye un problema de salud pública a nivel mundial debido a su tasa de mortalidad, en Colombia se han encontrado de 2-19/100.000 habitantes por año de pacientes con glioblastoma. Este tipo de cáncer corresponde a un tumor primario del SNC que se presenta en células gliales, diversas investigaciones han determinado un aumento en la expresión del gen IGF-I en este tipo cáncer. El objetivo de este estudio fue utilizar terapia génica de tipo antisentido y triple hélice con el fin de regular los niveles de expresión del gen IGF-I Para lo cual se cultivaron células somáticas de la línea C6 de glioma de ratón, luego fueron transfectadas por lipofección con los vectores de expresión pAnti–IGF-I y pMT-EP que tenían insertada una secuencia antisentido y triple hélice respectivamente, se evaluaron los niveles de expresión del gen IGF-I por RT-PCR con sondas taqman y se secuenció mediante electroforesis capilar un fragmento de 800pb de la región promotora de este gen. Se demostró una disminución de la expresión del gen en 80% y 60% para terapia triple hélice y antisentido respectivamente. Las secuencias del fragmento 800 pb del gen IGF-I en muestras normales, de cáncer frontal y de tumor maligno cerebral (glioma) no presentaron mutaciones. Estos hallazgos son promisorios y permiten proponer nuevas investigaciones en células humanas in vitro e in vivo para que puedan ser usadas mediante el uso de terapia celular con el propósito de obtención de vacunas.
URI: http://hdl.handle.net/11349/13227
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